首先我们来讲暗场显微镜的结构和特点,为什么叫做暗场显微镜,在什么实验能用到它,以及怎么用好它,相信在这篇文章你会有个详细的了解。
首先是暗视场显微镜的原理,在我们的日常生活中,室内飞扬的微粒灰尘是不易被看见的,但在暗的房间中如果有一束光线从门缝斜射进来,光束中灰尘便可见了,这是光学上的丁达尔现象。暗视场显微镜就是利用此原理设计的。它的结构特点主要是使用中央遮光板或暗场聚光器,常用的是抛物面聚光器,使光源的中央光束被阻挡.不能由下而上地通过标本进入物镜。从而使光线改变途径,倾斜地照射在观察的标本上,标本遇光发生反射或散射,散射的光线投入物镜内,因而整个视野是黑暗的。在暗场中所观察到的是被检物体的衍射光图像.并非物体的本身,所以只能看到物体的存在和运动,不能辨清物体的细微结构。但被检物体为非均质时,并大于1/2波长,则各级衍射光线同时进入物镜,在某种程度上可观察物体的构造。一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构,但却可分辨0.004um以上的微粒的存在和运动,这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2um)所不具有的特性,可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。
暗视场显微镜使用方法:
1.安装暗场聚光器检查聚光器的光轴(并非晶体光轴而指几何光学光轴)是否与显微镜的光路一致。聚光镜用中心调节旋钮合轴调整之后,圈锥光束的交点集中到标本平面上。
2.放标本放置标本时在聚光镜前透镜与载物片之间必须浸油。否则来自标本细节的反射光和衍射光束在载物玻片表面进行全反射。观察结果趋于失败。
3.调节聚光镜焦点操纵光源会聚透镜务使圆锥形光束的交点照射到标本平面上。
4.迭择物镜用于暗场观察的物镜中.油浸系或水浸系的物镜不能使用。就是干燥系物镜中也要挑选镜率在0.85以下为好。如果物镜镜口率过大时,来自聚光镜的部分直射光束进入物镜前透镜,从而干扰暗视野成像效应。如果使用油浸系物镜观察时,必须调节物镜内装孔径光栏。
5.光强的选择暗场显微镜中光能损失太大。因此必须选择光强最大的光源,才能取得较好效果。尤其以超聚光镜观察胶体微粒运动时,光强愈大愈好.
6.浸油的方法聚光镜与载玻片间浸油时特别注意是否有气泡。气泡可招致暗视野观察效果的完全破坏。
使用范围:
暗场生物显微镜特别适用于观察原虫、细菌的鞭毛、伪足运动,医学检验学范围适用于观察人体体液中螺旋体、尿管形、结晶或各种粒子